Beschreibung
Der AltoStar® CMV PCR Kit ist ein diagnostischer in vitro Test, basierend auf der real-time PCR Technologie, zur spezifischen Detektion und Quantifizierung von CMV Virus DNA im Plasma und Blut. Der AltoStar® CMV PCR Kit ist für die Verwendung mit dem CFX96 ™ Deep Well Echtzeit-PCR-Detektionssystem (Bio-Rad) in Kombination mit dem AltoStar® Automation System AM16, AltoStar® Purification Kit und der AltoStar® Internal Kontrolle ausgelegt und getestet. Die mit dem AltoStar® CMV PCR Kit erzielten Ergebnisse müssen immer in Verbindung mit anderen klinischen und Laborbefunden interpretiert werden. Das AltoStar® CMV PCR Kit ist für den Gebrauch durch professionelle Anwender gedacht (mit molekularbiologischer Ausbildung).
LOINC
(Logical Observations, Identifiers, Numbers and Codes
(Regenstrief-Institute))
72493-0
Ziel und Zweck der Untersuchung
Das humane Cytomegalievirus (CMV) ist ein Mitglied der Familie der Herpesviridae und gehört zur Subfamilie der Beta-Herpesviridae. Es besteht aus einem umhüllten Capsid mit einer linaeren Doppelstrang DNA. Das CMV Virus ist weltweit verbreitet. Es werden Infektionen in allen Altersgruppen ohne saisonale Unterschiede gefunden. Mit einer Seroprävalenz von 40-100%. Wie bei Infektionen mit anderen Herpesviren kommt es nach der Primärinfektion zur einer persistenten oder latente Infektion. Einer Reaktivierung kann auf der Basis verschiedener Stimuli stattfinden, meist jedoch im Rahmen einer Immunsuppression. Die meisten Infektionen Verlauf asymptomatisch. Jedoch können kongentiale Infektionen und Infektionen bei immunsuppremierten Patienten, mit einem schwerer, lebensbedrohlichem Verlauf einhergehen. CMV-PCR Daten sind wichtig für den Start einer präemptiven antiviralen Therapie bei Transplantpatienten bzw. zur Monitorisierung einer laufenden antiviralen Therapie.
Prinzip des Verfahrens
Der Test basiert auf der realtime-PCR Technologie. Mit Hilfe der Polymerase Kettenreaktion und unter Verwendung von spezifischen Primeren und einer spezifischen Sonde wird CMV DNA amplifiziert und detektiert. Die Sonden sind mit einem spezifischen Fluoreszenz-Reporter und einem Quencher markiert. Die Sonde spezifisch für CMV DNA ist mit FAM markiert während die spezifische Internal Control (IC) mit VIC markiert ist. Dies ermöglicht die parallele Messung beider Signale in spezifischen Kanälen des Detektors. Zusammenfassend besteht der Test aus zwei parallelen Prozessen in einem Einzelröhrchen Assay: 1.) PCR Amplifikation der Ziel-DNA und der Internal Control 2.) Simultane Detektion von PCR amplicons mit Fluoreszenz markierten Sonden.
Literatur
Abdul-Ali D, Kraft CS, Ingersoll J, Frempong M, Caliendo AM., Cytomegalovirus DNA stability in EDTA anti-coagulated EDTA whole blood and plasma samples., J Clin Virol. 2011 November ; 52(3): 222–224. Fryer JF, Heath AB, Anderson R, Minor PD and the Collaborative Study Group. 2010 Collaborative Study to Evaluate the Proposed 1st WHO International Standard for Human Cytomegalovirus (HCMV) for Nucleic Acid Amplification (NAT)- Based Assays. WHO ECBS Report WHO/BS/10.2138. Hodinka RL. Human Cytomegalovirus. In: Versalovic J, Carroll KC, Funke G, Jorgensen JH, Landry ML, Warnock DW, eds. Manual of Clinical Microbiology, 10th ed., American Society for Microbiology, Washington. 2011:1558-1574. Mocarski, Jr ES, Shenk T, Griffiths PD, Pass RF. Cytomegaloviruses. In: Knipe DM, Howley PM, et al., eds. Fields Virology, 6th ed., Lippincott Williams & Willkins, Philadelphia. 2013:1961-2014. Pellett PE, Roizman B. Herpesviridae. In: Knipe DM, Howley PM, et al., eds. Fields Virology, 6th ed., Lippincott Williams & Willkins, Philadelphia. 2013:1803-1822.
Ergebniseinheit
lU/ml
Referenzbereich
nicht nachgewiesen
Synonyme
quantitative CMV PCR
Analysenfrequenz
täglich
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
7d
Spezimen
EDTA-Plasma
Alternative Spezimen
(lt. Beipack)
EDTA-Vollblut
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
4,9 ml
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
K-EDTA Monovette
Spezielle Präanalytik - Probentransport
EDTA Blut muss innerhalb von 24 h im Labor sein
Messbereich
215 - 100.000.000 IU/ml
klinische Sensitivität
trifft nicht zu
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
Verschiedenste Endogene und Exogene Moleküle uns Substanzen wurden getestet. Siehe Herstelleranleitung Seite 100 Trotzdem kann es verschiedenste PCR Inhibitoren (incl. Medikamente)geben, die nicht getestet wurden und zu Störungen führen können. Auch potentielle Mutationen im CMV Genom können die Ergebnisse der PCR beeinflussen
klinische Spezifität
trifft nicht zu
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
keine bekannt. PCR wurde gegen verschiedenste Viren getestet. Siehe hierzu Seit 101
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