Beschreibung
Der AltoStar® BKV PCR Kit ist ein diagnostischer in vitro Test, basierend auf der real-time PCR Technologie, zur spezifischen Detektion und Quantifizierung von BKV Virus DNA im Plasma. Der AltoStar® BKV PCR Kit ist für die Verwendung mit dem CFX96 ™ Deep Well Echtzeit-PCR-Detektionssystem (Bio-Rad) in Kombination mit dem AltoStar® Automation System AM16, AltoStar® Purification Kit und der AltoStar® Internal Kontrolle ausgelegt und getestet. Die mit dem AltoStar® BKV PCR Kit erzielten Ergebnisse müssen immer in Verbindung mit anderen klinischen und Laborbefunden interpretiert werden. Das AltoStar® BKV PCR Kit ist für den Gebrauch durch professionelle Anwender gedacht (mit molekularbiologischer Ausbildung).
LOINC
(Logical Observations, Identifiers, Numbers and Codes
(Regenstrief-Institute))
41479-7
Ziel und Zweck der Untersuchung
Die Familie der Poliomaviren setzt sich aus zumindest 16 verschiedenen Spezies zusammen, die unterschiedliche Infektiösität für verschiedene Säugetierarten zeigen. Die human Polyomaviren BK Virus (BKV) und JC Virus (JCV) führen weltweit zu Infektionen bei Menschen. Typischerweise kommt es zu einer Infektion in der frühen Kindheit mit subklinischem Verlauf der Infektion und dann lebenslanger Persistenz. Das BK Virus befällt vor allem epitheliale Zellen der Niere, des Ureter oder der Harnblase. Erst bei Auftreten einer Immundefizienz kann es zu einem schweren Krankheitsverlauf kommen. Dies ist vor allem bei Knochenmark und Nieren transplantierten Patienten der Fall und äußert sich in hämmorhagischer Zystitis und Nephropathie. Polyomaviren sind kleine nicht behüllte Viren mit einer supercoiled doppelsträngigen DNA mit hoher Homology (ca70%)mit z.b. Simian Virus 40. Trotz hoher Homolgy sind die verschiedenen Spezies sehr an einen Wirt gebunden.
Prinzip des Verfahrens
Der Test basiert auf der realtime-PCR Technologie. Mit Hilfe der Polymerase Kettenreaktion und unter Verwendung von spezifischen Primeren und einer spezifischen Sonde wird BKV DNA amplifiziert und detektiert. Die Sonden sind mit einem spezifischen Fluoreszenz-Reporter und einem Quencher markiert. Die Sonde spezifisch für BKV DNA ist mit FAM markiert während die spezifische Internal Control (IC) mit VIC markiert ist. Dies ermöglicht die parallele Messung beider Signale in spezifischen Kanälen des Detektors. Zusammenfassend besteht der Test aus zwei parallelen Prozessen in einem Einzelröhrchen Assay: 1.) PCR Amplifikation der Ziel-DNA und der Internal Control 2.) Simultane Detektion von PCR amplicons mit Fluoreszenz markierten Sonden.
Literatur
Ali D, Kraft CS, Ingersoll J, Frempong M, Caliendo AM., Cytomegalovirus DNA stability in EDTA anti-coagulated EDTA whole blood and plasma samples., J Clin Virol. 2011 November ; 52(3): 222–224. Sheila Govind, Jason Hockley, Clare Morris and the Collaborative Study Group. Collaborative Study to establish the 1st WHO International Standard for BKV DNA for nucleic acid amplification technique (NAT)-based assays. WHOECBSReport2015;WHO/BS/2015.2270. Versalovic, James, Carroll, Karen C.,Funke, Guido, Jorgensen, James H., Landry, Marie Louise and David W. Warnock (ed). Manual of Clinical Microbiology. 10th Edition. ASM Press,2011. Cohen, Jonathan, Powderly, William G, and Steven M Opal. Infectious Diseases,Third Edition. Mosby, 2010.
Ergebniseinheit
lU/ml
Referenzbereich
nicht nachgewiesen
Synonyme
quantitative Polyoma (BKV)-PCR
Analysenfrequenz
täglich
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
7d
Spezimen
EDTA-Plasma
Alternative Spezimen
(lt. Beipack)
Urin
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
7.5ml
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
K-EDTA Monovette
Spezielle Präanalytik - Probentransport
EDTA Blut muss innerhalb von 24 im Labor sein
Messbereich
66 - 100,000,000 IU/ml
klinische Sensitivität
trifft nicht zu
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
Verschiedenste Endogene und Exogene Moleküle uns Substanzen wurden getestet. Siehe Herstelleranleitung Seite 98Trotzdem kann es verschiedenste PCR Inhibitoren (incl. Medikamente)geben, die nicht getestet wurden und zu Störungen führen können. Auch potentielle Mutationen im BKV Genom können die Ergebnisse der PCR beeinflussen
klinische Spezifität
trifft nicht zu
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
keine bekannt. PCR wurde gegen verschiedenste Viren getestet. Siehe hierzu Seit 98
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