Beschreibung
RT-PCR zum qualitativen Nachweis von Toxoplasma gondii
LOINC
(Logical Observations, Identifiers, Numbers and Codes
(Regenstrief-Institute))
16279-2
Ziel und Zweck der Untersuchung
qualitativer Nukleinsäure-Amplifikationstests zum Nachweis der DNA von Toxoplasma gondii in DNA-Proben, die aus in EDTA entnommenem Vollblut extrahiert wurden. Die Nachweismethode ist zur Verwendung bei der Diagnose von Toxoplasma gondii-Infektionen in Kombination mit den klinischen Patientendaten und weiteren Laborbefunden bestimmt.
Prinzip des Verfahrens
Der Assay besteht aus einer Echtzeit-Amplifikationsreaktion mit einem programmierbaren Thermostat, der mit einem optischen System zum Fluoreszenznachweis (Thermocycler für die Echtzeit-Amplifikation) ausgestattet ist. In jeder Vertiefung werden zwei mplifikationsreaktionen durchgeführt, wobei zunächst aus den Proben extrahierte DNA getestet wird: eine spezifische Reaktion für die RE-Region von Toxoplasma gondii (200 bis 300 Mal im Genom wiederholt) und eine spezifische Reaktion für eine künstliche DNA-Sequenz (IC2, exogene Internal Control). Die mit einem FAM-Fluorophor markierte, Toxoplasma gondii-spezifische Sonde mit ELITe MGB®- Technologie wird aktiviert, wenn sie mit dem spezifischen Produkt der Toxoplasma gondii-Amplifikationsreaktion hybridisiert. Die mit einem AP525-Fluorophor (analog zu VIC) markierte, für die Internal Control spezifische Sonde mit ELITe MGB®-Technologie wird aktiviert, wenn sie mit dem spezifischen Produkt der Amplifikationsreaktion der Internal Control hybridisiert. Die Fluoreszenzemission erhöht sich mit Zunahme des spezifischen Produkts der Amplifikationsreaktion und wird vom Gerät gemessen und aufgezeichnet. Durch die Verarbeitung der Daten lässt sich das Vorhandensein von Toxoplasma gondii-DNA in der Ausgangsprobe nachweisen.
Literatur
Robert-Gangneux et al. Evaluation of Toxoplasma ELITe MGB Real-Time PCR Assay for Diagnosis of Toxoplasmosis. J Clin Microbiol. 2017 May; 55(5): 1369–1376.
Ergebniseinheit
qualitativ
Referenzbereich
nicht nachgewiesen
Analysenfrequenz
bei Bedarf
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
3 d
Spezimen
EDTA-Vollblut
Alternative Spezimen
(lt. Beipack)
Liquor
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
2,5 ml
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
K-EDTA Monovette
Liquor ohne Zusätze
Spezielle Präanalytik - Probentransport
entfällt
Messbereich
qualitativ
klinische Sensitivität
96,6 % in Vollblut, 100 % in Liqour
klinische Spezifität
98 % bei Vollblut Proben
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
keine bekannt, getestet gegen Leishmania donovani, CMV, VZV, Adenovirus, Parvovirus B19, Neospora caninum und Plasmodium falciparum
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