Beschreibung
Der AltoStar® Parvovirus B19 PCR Kit ist ein diagnostischer in vitro Test, basierend auf der real-time PCR Technologie, zur spezifischen Detektion und Quantifizierung von Parvovirus B19 Virus DNA im Plasma. Der AltoStar® Parvovirus B19 PCR Kit ist für die Verwendung mit dem CFX96 ™ Deep Well Echtzeit-PCR-Detektionssystem (Bio-Rad) in Kombination mit dem AltoStar® Automation System AM16, AltoStar® Purification Kit und der AltoStar® Internal Kontrolle ausgelegt und getestet. Die mit dem AltoStar® Parvovirus B19 PCR Kit erzielten Ergebnisse müssen immer in Verbindung mit anderen klinischen und Laborbefunden interpretiert werden. Das AltoStar® Parvovirus B19 PCR Kit ist für den Gebrauch durch professionelle Anwender gedacht (mit molekularbiologischer Ausbildung).
LOINC
(Logical Observations, Identifiers, Numbers and Codes
(Regenstrief-Institute))
49431-0
Ziel und Zweck der Untersuchung
Das humane Parvovirus B19 (Parvovirus B19), auch Erythrovirus B19 genannt, war das erste bekannte humane Virus in der Familie der Parvovirinae und der Gattung Erythrovirus. Das Virus ist ein nicht umhülltes ikosaedrisches Virus, das ein einzelsträngiges lineares DNA-Genom enthält. Parvovirus B19 verursacht bei Kindern einen typischen Hautausschlag, der als Erythema infectiosum bezeichnet wird. Zusätzlich ist das Parvovirus B19 die Hauptursache für eine plastische Krise bei Patienten mit hämolytischer Anämie. Schwere fetale Komplikationen können beobachtet werden, insbesondere nach Infektionen der Mutter während des zweiten und dritten Trimesters. Drei verschiedene Genotypen (Genotyp I-III) des menschlichen Parvovirus B19 wurden identifiziert, die bis zu 15% in der Nukleotididentität variieren. Basierend auf Sequenzanalyse und biologischen Eigenschaften hat das Internationale Komitee für Taxonomie der Viren, Vertreter der drei Genotypen als Spezies des humanen Parvovirus B19 klassifiziert. In Europa schreiben regulatorische Anforderungen vor, dass Plasmapools, die bei der Herstellung von Anti-D-Immunglobulin und Plasma, verwendet werden, auf die Parvovirus B19-DNA getestet werden. Solche Plasmapools dürfen eine Grenzkonzentration von 10 IE / μl für Parvovirus B19-DNA, wie von der WHO definiert, nicht überschreiten (3. IS NIBSC-Code 12/208).
Prinzip des Verfahrens
Der Test basiert auf der realtime-PCR Technologie. Mit Hilfe der Polymerase Kettenreaktion und unter Verwendung von spezifischen Primeren und einer spezifischen Sonde wird Parvovirus B19 DNA amplifiziert und detektiert. Die Sonden sind mit einem spezifischen Fluoreszenz-Reporter und einem Quencher markiert. Die Sonde spezifisch für Parvovirus B19 DNA ist mit FAM markiert während die spezifische Internal Control (IC) mit VIC markiert ist. Dies ermöglicht die parallele Messung beider Signale in spezifischen Kanälen des Detektors. Zusammenfassend besteht der Test aus zwei parallelen Prozessen in einem Einzelröhrchen Assay: 1.) PCR Amplifikation der Ziel-DNA und der Internal Control 2.) Simultane Detektion von PCR amplicons mit Fluoreszenz markierten Sonden.
Literatur
Abdul-Ali D, Kraft CS, Ingersoll J, Frempong M, Caliendo AM., Cytomegalovirus DNA stability in EDTA anti-coagulated EDTA whole blood and plasma samples., J Clin Virol. 2011 November ; 52(3): 222–224. Fryer JF, Heath AB, Morris CL, and the collaborative study group. Collaborative study to evaluate the proposed 3rd WHO International Standard for parvovirus B19 (B19V) for nucleic acid amplification technology (NAT)-based assays. WHO ECBS Report 2013; WHO/BS/2013.2224. Versalovic J, Carroll KC, Funke G, Jorgensen JH, Landry ML, Warnock DW, eds. Manual of Clinical Microbiology, 10th ed., American Society for Microbiology, Washington. 2011. Cohen, Jonathan, Powderly, William G, and Steven M Opal. Infectious Diseases, Third Edition. Mosby, 2010.
Ergebniseinheit
lU/ml
Referenzbereich
nicht nachgewiesen
Analysenfrequenz
täglich
Nachforderungsmöglichkeit der Analyse
7d
Spezimen
EDTA-Plasma
Mindestvolumen pro Anforderung vor Zentrifugation
(vor Zentrifugation)
7.5 ml
Abnahmegefäß inkl. Zusatzstoffe
K-EDTA Monovette
Spezielle Präanalytik - Probentransport
EDTA Blut muss innerhalb von 24 im LAbor sein
Messbereich
121 - 100,000,000 IU/ml
klinische Sensitivität
trifft nicht zu
Allgemeine Störungen
(z.B. Lipämie, Hämolyse, Bilirubinämie)
Verschiedenste Endogene und Exogene Moleküle uns Substanzen wurden getestet. Siehe Herstelleranleitung Seite 100 Trotzdem kann es verschiedenste PCR Inhibitoren (incl. Medikamente)geben, die nicht getestet wurden und zu Störungen führen können. Auch potentielle Mutationen im Parvovirus B19 Genom können die Ergebnisse der PCR beeinflussen
klinische Spezifität
trifft nicht zu
Kreuzreaktionen
(z.B. immunologisch)
keine bekannt. PCR wurde gegen verschiedenste Viren getestet. Siehe hierzu Seit 100
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